一、前言 佐劑是疫苗的一種添加劑,當(dāng)它先于抗原或與抗原混合注入機(jī)體后,能夠增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答或者改變免疫反應(yīng)的類(lèi)型,屬于非特異性的免疫增強(qiáng)劑。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)和基因工程技術(shù)的迅速發(fā)展,針對(duì)不同疾病已開(kāi)展了各種新型基因工程疫苗的研制,佐劑尤其是新型免疫佐劑的研究就顯得尤為迫切。 在標(biāo)準(zhǔn) T/CVDA02《復(fù)合礦物油動(dòng)物疫苗佐劑》中,對(duì)于佐劑的質(zhì)量檢測(cè)中有明確規(guī)定測(cè)定羥值含量,本方法參考其中的檢測(cè)方法制定了運(yùn)用電位滴定檢測(cè)的方法。該方法檢測(cè)方便,減少了人為判斷指示劑顏色對(duì)結(jié)果的誤差影響,增加了檢測(cè)精確度,并且提高了檢測(cè)效率,解放操作員的雙手。 二、儀器與試劑 2.1、儀器 JH-T6 全自動(dòng)電位滴定儀,PH 復(fù)合電極,水浴鍋,分析天平等。 2.2、試劑 ?;噭ㄈ?duì)甲苯磺酸 14.4g, 置干燥的 500ml 具塞錐形瓶中,加醋酸乙酯 360ml,振搖使溶解,緩緩加入醋酐 120ml 搖勻,密塞,放置 3 日后備用),吡啶-水(3:5),氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定液(1mol/L)。 三、實(shí)驗(yàn)方法 3.1、樣品檢測(cè) 準(zhǔn)確稱取 2g 左右樣品,置于滴定杯中,加入 5mL 酰化試劑,封口膜密封,輕輕搖動(dòng)至溶解。置于 50℃水浴加熱 25min ,放冷,加吡啶-水(3:5)20mL ,5 分鐘后用氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定液(1mol/L),以 PH 復(fù)合電極為工作電極,在JH-T6上進(jìn)行滴定至終點(diǎn)。同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。 設(shè)定滴定儀參數(shù)如表 1 所示: 表 1 滴定參數(shù)設(shè)置 滴定模式: | 動(dòng)態(tài)滴定 | 最小添加體積 | 0.02mL | 電極平衡時(shí)間: | 4s | 預(yù)攪拌時(shí)間: | 60s |
電極平衡電位: | 1mv | 滴定速度: | 標(biāo)準(zhǔn) | 結(jié)束體積: | 10mL | 相關(guān)系數(shù): | 12.69 | 電位突躍量: | 200 | 補(bǔ)液速度: | 5 | 攪拌速度: | 7 | 滴定前平衡電位: | 10mv |
3.2、圖譜測(cè)試示例 
四、結(jié)果與討論 4.1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表 2 所示: 表 2 測(cè)試結(jié)果 樣品批號(hào) | 樣品序號(hào) | 樣品質(zhì)量/g | 滴定液濃度(氫氧化鉀) /(mol/L) | 滴定體積/mL | 羥值(mg/g) | 平均值 | 20211201 | 空白 | / | 1.01838 | 26.225 | / | / | 1 | 2.01652 | 25.475 | 21.249 | 23.301 | 2 | 2.01019 | 25.386 | 23.802 | 3 | 2.01160 | 25.350 | 24.851 | 20220101 | 1 | 2.02788 | 25.365 | 24.229 | 24.335 | 2 | 2.09250 | 25.326 | 24.545 | 3 | 2.03595 | 25.361 | 24.231 |
4.2、結(jié)論 本次測(cè)定的動(dòng)物疫苗佐劑的羥值均小于參考標(biāo)準(zhǔn)要求中的 25(mg/g),測(cè)試結(jié)果重復(fù)性良好,滿足檢測(cè)要求。 參考文獻(xiàn) [1] T/CVDA02 復(fù)合礦物油動(dòng)物疫苗佐劑[ S ].
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